RAW264.7细胞来自第三军医大学(中国重庆),在5%二氧化碳下以37℃补充10%FBS的DMEM培养基培养。为了停止细胞增殖,将3×104细胞/cm2的RAW264.7细胞播种不同的基底上培养三天。去除原培养基后加入FDA(2μL、10μg/mL)和DMEM培养基(1mL)的混合液,静置5min。通过共聚焦激光扫描显微镜(德国徕卡市CLSM、TCSSP5)观察染色细胞。
在5%二氧化碳大气下,在37℃下用DMEM培养基补充10%FBS培养分离的成骨细胞。第三代的成骨细胞的初始播种密度为1×104细胞/cm2。对于增殖检测,样品分为两组:预浸泡(0d)和预浸泡(3d)。在预浸泡(0d)组中,在各种基底上直接培养成骨细胞;但在预浸泡(3d)组中,则在培养成骨细胞前将样品在PBS溶液(pH7.4)浸泡3天。在3天培养后,分别通过FDA染色和MTT法研究了成骨细胞在正常或预浸基底上的增殖和可行性。